顯色淡，靈敏度偏低

1

 試劑盒未充分平衡

試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開(kāi)盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）

2

 樣品不適合做ELISA檢測(cè)

樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測(cè)或者需要優(yōu)化檢測(cè)的條件（例如稀釋液的成分）

3

 酶標(biāo)板在貯存或洗后拍干時(shí)過(guò)分干燥

防止板過(guò)于干燥

4

 包被抗體遭到破壞

操作溫和，移液槍不能碰到孔底

5

 樣本和抗體孵育條件不合適

按照說(shuō)明書(shū)條件，建議孵育過(guò)程中全程振蕩孵育。

6

 洗滌浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

按照說(shuō)明書(shū)操作。勿人為增加浸泡時(shí)間；

7

 偶聯(lián)HRP試劑污染

棄去試劑，重新配置

8

 錯(cuò)誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑

棄去試劑，重新配置

9

 TMB底物孵育時(shí)間過(guò)短，因非人為因素影響，需要優(yōu)化孵育時(shí)間

確定合適的孵育時(shí)間：人為判定-最高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)深藍(lán)色；S4-5有淡藍(lán)色；機(jī)器判定620 nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值達(dá)到0.6-0.65

10

 樣本濃度過(guò)高或存在基質(zhì)效應(yīng)

建議做不同稀釋倍數(shù)，確認(rèn)樣本最佳稀釋倍數(shù)。

11

 酶標(biāo)儀濾光片設(shè)置有問(wèn)題或者波長(zhǎng)選擇不對(duì)

確認(rèn)儀器設(shè)置及選擇正確的波長(zhǎng)檢測(cè)。

12

 酶標(biāo)板不適合做ELISA

不能使用細(xì)胞培養(yǎng)板，建議使用ELISA專用高吸附力板子。